La Galleria è particolarmente famosa per le sue sculture di Michelangelo: i Prigionieri, San Matteo e, in particolar modo, la statua del David che fu trasferita qui nel 1873 da Piazza della Signoria da una tribuna designata appositamente. Nelle stanze adiacenti, che facevano parte di due antichi conventi, importanti opere d'arte raccolte qui nel diciannovesimo secolo dall' Accademia del Design, dall' Accademia delle Belle Arti e dai soppressi conventi. I beni comprendono principalmente pitture religiose dei maggiori artisti operanti a Firenze e dintorni fra la metà del XIII e la fine del XVI secolo. La collezione è particolarmente importante per i suoi quadri dallo sfondo dorato. Nelle stanze del primo piano vi è una sequenza di poliptici tardo gotici, completi in tutte le loro parti. Vi è anche una collezione di sculture in gesso degli scultori del XIX secolo Lorenzo Bartolini e Luigi Pampaloni, oltre ad una sezione di icone russe. Recentemente la Galleria è stata ulteriormente valorizzata dall'importante collezione di strumenti musicali antichi dal Conservatorio Cherubini e il Museo degli Strumenti Musicali.